類型: 斑馬魚研究設(shè)備
名稱:斑馬魚胞內(nèi)單細(xì)胞測量系統(tǒng)
CellFish intracellular single heart cell measuring system
型號:ZFS-03
MDE 公司通過標(biāo)準(zhǔn)的微電極技術(shù),多年來已成功的設(shè)計(jì)開發(fā)了自己獨(dú)特的工作站。更深入的開發(fā)了針對胚胎(the embryonic)和成年斑馬魚心臟(adult zebrafish heart)離子通道( ion channels)電壓響應(yīng)(AP)的測量-----CellFish system。
標(biāo)準(zhǔn)微電極方法優(yōu)勢(The advantage of the standard microelectrode method)
近幾十年來研究證明,斑馬魚是心臟研究的首選研究課題,尤其是心臟生理和藥理試驗(yàn),斑馬魚心臟電生理學(xué)顯示了許多相似點(diǎn),目前使用的哺乳動物實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,例?離子通道(ion channels)、心電圖(ECG)等,它有一個(gè)獨(dú)特的生理發(fā)展適應(yīng)性?;谙嗨菩缘陌l(fā)現(xiàn),應(yīng)用在哺乳動物的細(xì)胞(cellular)技術(shù)(標(biāo)準(zhǔn)微電極(standard microelectrode)、膜片鉗(patch clamp))也用于對斑馬魚的研究了。
Atrial and ventricular cardiac action potentials
成年斑馬魚the adult zebrafish (A),人類human(B)和小鼠mouse (C)心房和心室心臟動作電位
圖中分別是成年斑馬魚the adult zebrafish (A),人類human(B)和小鼠mouse (C)的心房(左列)和心室(右列)心臟動作電位的代表性圖形,斑馬魚自發(fā)的搏動的心臟APs記錄是在28°下測量的,而人類和小鼠心臟組織是在37°C下通過1赫茲的頻率刺激測定的,斑馬魚的記錄是從心室的心尖一半和從心房的中心區(qū)域獲得。
標(biāo)準(zhǔn)微電極技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是,橫跨膜的變化記錄從制備電極刺穿到放大器,在一個(gè)細(xì)胞的準(zhǔn)備、電極的尖端檢測細(xì)胞內(nèi)空間與細(xì)胞外空間的電勢變化。這種技術(shù)確保了細(xì)胞內(nèi)外空間之間的電壓變化,由此可對所引起的給定區(qū)域的所有活躍的離子通道進(jìn)行測量,測量方法獲得的ECG信號,定義了心電圖(ECG)的曲線形成,該心臟生理檢查方法的曲線形成已在臨床實(shí)踐中廣泛使用。
系統(tǒng)組成
1. 機(jī)械單元(Mechanical unit);
2. 測量系統(tǒng)(Measuring system):
① 高輸入阻抗(High input impedance)、低噪聲放大器 low noise amplifier );
② 數(shù)據(jù)顯示、存儲和分析硬件/軟件(EASY-CEL);
它的底部是一個(gè)高度穩(wěn)定,無振動平臺,從而保持了成魚 (adult)和胚胎標(biāo)本(embryonic specimen)的制備,各組件功能:
Mechanical unit(機(jī)械裝置) Flowchart the mechanical unit(機(jī)械裝置流程圖)
1) 成魚心臟解剖器官浴模式(The organbath modes for adult fish heart dissection)
開循環(huán)(Open circuit)
生理溶液在器官浴里不斷流動和保持合適的液體水位便于泵抽吸。
閉循環(huán)(Closed circuit)
流動的生理溶液中止:龍頭1閉合,龍頭3打開時(shí)泵就停止,該溶液就可以添加到器官里。
2) 試驗(yàn)裝置(The setup of equipment necessary for the experiment)
系統(tǒng)設(shè)計(jì)優(yōu)點(diǎn)之一是所必需的試驗(yàn)設(shè)備(pl:操縱器(manipulators)、器官浴(organ bath)、燈光( lighting)、等等)被安裝在工作臺最佳位置,另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是試驗(yàn)人員可以靈活的改變工作臺上的器官浴位置,以適應(yīng)任何的物種,設(shè)定穿刺由器官浴的縱向可調(diào)支承的位置。該解決方案允許多個(gè)胚胎的同時(shí)測量。
The mechanical design of the system
Embryo in the bath 浴槽里胚胎 The organ bath 器官浴槽
存儲模式(Store mode)
提供有主曲線顯示,某一個(gè)特定時(shí)刻的存儲、在測量過程中的任何時(shí)間、并比較該曲線與在該時(shí)刻測量或監(jiān)測的曲線。此外,還有一種可能性,以計(jì)算平均距離的曲線。
Store mode Average mode
刺激隔離器(Internal stimulator with isolated power output stage)
Parameter ranges:參數(shù)范圍:
1. 脈沖周期Pulse Period (PP)500μs...999 s
2. 延遲Delay (DE)0.1μs...999 s
3. 脈沖寬度Impulse Width (PW)10μs.. .999 s
4. 訓(xùn)練延遲Train Delay (TD)10 μs...999 s
5. 訓(xùn)練編號Train Number (TN) 1 ... 999
刺激隔離器性能規(guī)格:
1. 最大輸出電壓Max. output voltage ± 10 V, ± 100 V
2. 電流限制Current limit ± 10 mA, ± 100 mA
Stimulator settings Stimulator module
刺激隔離器(Internal stimulator with isolated power output stage)
Parameter ranges:參數(shù)范圍:
1. 脈沖周期Pulse Period (PP)500μs...999 s
2. 延遲Delay (DE)0.1μs...999 s
3. 脈沖寬度Impulse Width (PW)10μs.. .999 s
4. 訓(xùn)練延遲Train Delay (TD)10 μs...999 s
5. 訓(xùn)練編號Train Number (TN) 1 ... 999
刺激隔離器性能規(guī)格:
1. 最大輸出電壓Max. output voltage ± 10 V, ± 100 V
2. 電流限制Current limit ± 10 mA, ± 100 mA
心臟單細(xì)胞(Heart single-cell registration)
對于與標(biāo)準(zhǔn)的微電極技術(shù)測量心臟的AP曲線,在聯(lián)機(jī)模式中的以下參數(shù)被顯示,分析和存儲,在測量過程中。在后期的脫機(jī)模式下的AP曲線和保存的參數(shù)可被重新分析和修飾:
1. RP – rest potential
2. TOP – taking off potential
3. APA1 – AP to the RP = OS – RP
4. APA2 – AP to the MDP =OS – MDP
5. MDP – minimum potential
6. OS – overshot
7. APD10 –10% coming back
8. APD25 –25% coming back
9. APD50 –50% coming back
10. APD75 –75% coming back
11. APD90 - 90% coming back
12. APD50mV –50mV coming back
13. CT – leading time
14. dVmax – the fastest point of the rising branch of the sign
15. dVmin – the fastest point of the descending branch of the signal
系統(tǒng)配置:
完整的工作站(Complete Workstation): 包含放大器,硬件接口,軟件,刺激隔離器和電腦。
preamplifier Stimulator module Cetral workstation
刺激隔離器
Converter preamplifier Easy CELL software module
附件(Additional devices) :
法拉第籠KFA Faraday cage 球形操縱器帶刺激電極 精密操縱器 (1μm/pace X,Y plane)
測量系統(tǒng)(The measuring system)
為了實(shí)現(xiàn)這些有利的參數(shù),線性放大器被選為參考接地,所有的這些服務(wù)功能由放大器提供(例如:容量補(bǔ)償(capacity compensation)、電阻測量(resistance measurement),直流電極接觸電勢取消(DC electrode contact potential cancellation )等)都可以通過不斷的電阻(1?)參考接地。
包含組件:
1. 高輸入阻抗(high input impedance(1012?),
低噪音(low noise),低容量(low capacity(25pF) 放大器,
2. 隔離刺激器(isolated stimulator end stage 10V/10mA),
3. INTRASYS測量、分析和數(shù)據(jù)存儲軟硬件系統(tǒng)與刺激器模塊。
為了避免外部噪聲污染(由于該系統(tǒng)不包含任何過濾器),并保持容量低,與力學(xué)共同的屏蔽接地點(diǎn)已被設(shè)計(jì)好。通過這一點(diǎn),我們可連接到法拉第籠的屏蔽接地(GND)。
測量系統(tǒng)(The measuring system)
1) 放大器(amplifier)
該放大器是為標(biāo)準(zhǔn)的微電極技術(shù)開發(fā)的,應(yīng)用技術(shù)解決方案允許使用10MΩ和100MΩ之間的玻璃電極的AP信號精確傳輸。放大器包含兩部分:一個(gè)是““INTE”高輸入阻抗前置放大器,它可以直接連接到電極套管(例如:WPI, Harvard, Clark, etc.);另一元件是功率放大器,其中包含先前描述的電路元件,并且提供了連接到數(shù)據(jù)成像,存儲和分析用硬件-軟件系統(tǒng)(EASY-CEL)。
preamplifier amplifier
2) EASY-CEL 軟硬件
EASY-CEL是一個(gè)單通道存儲示波器軟件,該軟件可被用于顯示,存儲和分析細(xì)胞內(nèi)外電位,引發(fā)在心臟或任何其他解剖區(qū)域(例如:腦(brain)、骨髓( bone marrow)等)的體內(nèi)( in-vivo)或體外(in-vitro)的方法。
單細(xì)胞活動(One-cell activity) 皮層誘發(fā)電位(Cortical evoked potentials)
心臟單細(xì)胞(Heart one cell) 細(xì)胞內(nèi)單個(gè)神經(jīng)細(xì)胞(Intracellular one neuronal cell)
心臟單細(xì)胞(Heart single-cell registration)
對于與標(biāo)準(zhǔn)的微電極技術(shù)測量心臟的AP曲線,在聯(lián)機(jī)模式中的以下參數(shù)被顯示,分析和存儲,在測量過程中。在后期的脫機(jī)模式下的AP曲線和保存的參數(shù)可被重新分析和修飾:
1. RP – rest potential
2. TOP – taking off potential
3. APA1 – AP to the RP = OS – RP
4. APA2 – AP to the MDP =OS – MDP
5. MDP – minimum potential
6. OS – overshot
7. APD10 –10% coming back
8. APD25 –25% coming back
9. APD50 –50% coming back
10. APD75 –75% coming back
11. APD90 - 90% coming back
12. APD50mV –50mV coming back
13. CT – leading time
14. dVmax – the fastest point of the rising branch of the sign
15. dVmin – the fastest point of the descending branch of the signal
Software surface Analyzed parameters